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服務(wù)熱線：17765108483
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| 產(chǎn)地 | 上海 |
| 保存條件 | 2-8℃ |
| 品牌 | 睿創(chuàng)生物 |
| 貨號 | RC-E110638A |
| 用途 | 科研 |
| 檢測方法 | 酶聯(lián)免疫法 |
| 保質(zhì)期 | 六個月 |
| 適應(yīng)物種 | 植物 |
| 檢測限 | 0-480 U/L |
| 數(shù)量 | 98 |
| 包裝規(guī)格 | 96T/48T |
| 標(biāo)記物 | HRP標(biāo)記物 |
| 樣本 | 組織上清等 |
| 應(yīng)用 | 酶活/含量檢測 |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
植物（Plant）對羥基苯丙酮酸雙加氧酶（HPPD）
ELISA檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被對羥基苯丙酮酸雙加氧酶（HPPD）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并chè底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的對羥基苯丙酮酸雙加氧酶（HPPD）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品活性。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。
3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。
4. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存
于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶wan全溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
6.試劑盒組成
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名稱 |
96孔配置 |
48孔配置 |
備注 |
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微孔酶標(biāo)板 |
12孔×8條 |
12孔×4條 |
無 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
0.3mL*6管 |
0.3mL*6管 |
無 |
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樣本稀釋液 |
6mL |
3mL |
無 |
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檢測抗體-HRP |
10mL |
5mL |
無 |
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20×洗滌緩沖液 |
25mL |
15mL |
按說明書進(jìn)行稀釋 |
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底物A |
6mL |
3mL |
無 |
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底物B |
6mL |
3mL |
無 |
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終止液 |
6mL |
3mL |
無 |
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封板膜 |
2張 |
2張 |
無 |
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說明書 |
1份 |
1份 |
無 |
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自封袋 |
1個 |
1個 |
無 |
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、30、60、120、240、480 U/L
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2. 自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：zuì低檢測濃度小于1.0 U/L。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。
