細(xì)胞系培養(yǎng)中常見的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點(diǎn)污染、真菌污染和原生動(dòng)物污染。這些污染在細(xì)胞培養(yǎng)中的特點(diǎn)及相應(yīng)的解決辦法如下：
 
細(xì)菌污染
細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會(huì)呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會(huì)變得渾濁、黃色，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯影響。
解決方法：仔細(xì)檢查器具的滅菌情況，確保通風(fēng)時(shí)間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生素。
 
支原體污染
支原體是隱蔽的污染物，不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象，比如細(xì)胞病變和濁度或 pH 值變化（即使在嚴(yán)重污染的培養(yǎng)基中），這樣就會(huì)導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯(cuò)誤的安全感。而在牛血清中，支原體是最常見的微生物之一。
解決方法：通常的過濾滅菌方法對(duì)支原體沒有影響。細(xì)胞一旦被支原體污染，特別是對(duì)重要的細(xì)胞系，必須去除支原體，一般的方法有抗生素治療、抗血清治療和抗血清與補(bǔ)體聯(lián)合治療。值得注意的是，支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁。因此，它對(duì)作用于細(xì)胞壁的生物合成抗生素（如 β-內(nèi)酰胺類、萬古霉素等）完全不敏感，并且通常對(duì)多粘菌素、利福平和磺胺類藥物具有耐藥性。相反，四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對(duì)支原體的抑制作用最強(qiáng)，而氨基糖苷類和氯霉素的抑制作用較弱。
 
黑點(diǎn)污染
黑色的游動(dòng)點(diǎn)能穿透濾膜并在空氣中擴(kuò)散。它們?cè)诘捅剁R下顯示為黑色圓點(diǎn)，在高倍鏡下顯示為可移動(dòng)的黑色斑點(diǎn)。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細(xì)胞仍可使用。通常，黑點(diǎn)污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，運(yùn)動(dòng)物體無明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化。在同一批血清培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。
解決方法：黑點(diǎn)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)沒有明顯影響，細(xì)胞增殖后會(huì)自然消失，因此除了血清置換外，無需特殊處理。細(xì)胞系如果細(xì)胞可能被小的運(yùn)動(dòng)點(diǎn)污染，建議增加培養(yǎng)皿細(xì)胞密度，以提高細(xì)胞存活率。
 
真菌污染
真菌污染后，培養(yǎng)基一般清澈，保持原色。細(xì)絲可以在顯微鏡下觀察到。一些真菌類似于死細(xì)胞碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚，比較容易區(qū)分。此外，它們會(huì)慢慢長(zhǎng)出細(xì)細(xì)的黑色細(xì)絲，因?yàn)樗鼈兩L(zhǎng)得比較慢，不像細(xì)菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染，它們將很難存活。
解決方法：一旦被真菌污染，果斷丟棄，然后對(duì)細(xì)胞房、CO2 培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)基進(jìn)行徹底消毒。
 
原生動(dòng)物污染
原生動(dòng)物污染后，細(xì)胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下，大量的小點(diǎn)來回移動(dòng)。細(xì)胞系雖然此時(shí)細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，但繁殖速度減慢，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，邊緣不清，變得不透明。原生動(dòng)物與細(xì)胞形成共生關(guān)系。同時(shí)，原生動(dòng)物與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)。這種共生現(xiàn)象非常普遍，但以細(xì)胞為主，因?yàn)樵鷦?dòng)物的數(shù)量相對(duì)較少，因而對(duì)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)沒有影響，只有當(dāng)它們達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，才爆發(fā)成為惡性循環(huán)。
 
解決方法：原生動(dòng)物污染的原因有很多，如液體消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等，如果細(xì)胞足夠，果斷丟棄被污染的細(xì)胞和復(fù)蘇細(xì)胞。如果要保留，需要購(gòu)買使用相關(guān)的滅菌試劑。